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miRNA mimics實驗

簡要描述:miRNA mimics實驗是模擬生物體內源的miRNAs,運用化學合成的方法合成,能增強內源性miRNA的功能。

  • 更新時間:2024-06-17
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序列分析表明,至少有1/3的人類基因miRNA調控相關,而且越來越多的試驗證據(jù)表明miRNA還有很多功能未被發(fā)現(xiàn)。研究基因的功能通常是將其從基因組中敲除,然后觀察敲除前后的變化,但在破譯miRNA的功能,我們一般不會采用這種策略,而是通過增強或減弱該miRNA的表達來鑒定其功能。

miRNA mimic能模擬細胞中內源性成熟miRNA的高水平表達,以增強內源性miRNA的調控作用,是miRNA功能研究的一大利器。miRNA mimic是一種簡單高效的miRNA研究工具,只需用轉染試劑包裹即可轉染進入細胞,無需構建載體的繁瑣操作,無需病毒防護方面的擔憂,用轉染對照即可觀察其轉染效率。

miRNA mimic的轉染效果,可從靶基因RNA表達水平,蛋白表達水平,細胞功能等方面檢測。這些實驗能夠獲得miRNA的生物學功能數(shù)據(jù),及應用于miRNA的靶基因驗證方面。通常這些實驗涉及到miRNA mimic的轉染,或者與報告基因載體共轉。

MEF細胞內轉染miRNA表達載體(2ug/mL)或者miRNA mimic(50nM),48h后檢測miRNA的表達,結果顯示,表達載體僅能實現(xiàn)10倍的過表達,而miRNA mimic可實現(xiàn)600倍以上的過表達。對于短期(<1周)的miRNA功能獲得性細胞研究而言,miRNA mimic是zhd選擇。

從生物學機理上來說,miRNA有成為腫瘤標志物的優(yōu)勢,它是腫瘤細胞主動分泌的,隨著腫瘤細胞的生成、凋零,miRNA的表達量一直在變化,所以每種miRNA的表達量代表了在某一刻人類體內健康或者疾病的信息。 MiRXES在人體這2000多種miRNA中,他們找出了與胃癌高度相關的12種miRNA,當人體中出現(xiàn)胃癌細胞時,這12種miRNA在血液中的濃度會出現(xiàn)異常。



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